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“植物线粒体提取试剂盒”参数说明
| 级别： | 实验纯LR |
“植物线粒体提取试剂盒”详细介绍
货号：P0045名称：植物线粒体提取试剂盒规格：50T/100T价格：420/780CAS#：植物线粒体提取试剂盒一，试剂盒组份组份P0045(50T)P0045(100T)LysisBuffer100mL200mLβ-巯基乙醇1ml1mlMito-WashBuffer25mL50mLStoreBuffer5mL10mL二，说明植物线粒体提取试剂盒可用于从植物叶片组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于田间采摘或者实验室培养的植物叶片中线粒体的制备。其制备物，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。但不适用于进一步DNA提取。三，操作步骤1.样本采集前处理：无论田间自然生长还是实验室组织培养，采摘前须避光生长24-48小时，以减少叶片组织中糖类及叶绿体含量。取适量LysisBuffer，加入0.5%β-巯基乙醇，10mlLysisBuffer加入50ulβ-巯基乙醇，混匀，形成LysisBuffer/β-巯基乙醇溶液，此溶液可2-8度保存一个月。2.叶片用蒸馏水清洗2-3次，滤纸吸干，有条件请用液氮研磨叶片1-2克，研磨完后，取800mg左右研磨的叶片粉，加入1.5ml预冷的LysisBuffer/β-巯基乙醇溶液，混匀。如果无条件（无液氮），请预冷研钵，取洗过的叶片1000mg，用剪刀剪为碎块放入玻璃匀浆器或者研钵中。加入1.5ml预冷的LysisBuffer/β-巯基乙醇溶液，冰上研磨至看不见明显组织块；3.将研磨物放置合适的离心管，4℃，1000×g离心5min；4.将上清转移到一新的离心管中，在沉淀中加入0.5mlLysisBuffer/β-巯基乙醇溶液，混匀，再次4℃，1000×g离心5min，取上清；合并两次上清，将上清4℃1000×g再次离心5min。5．取上清，加入一新的离心管中，4℃，16,000×g离心10min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底。6.在线粒体沉淀中加入0.5mLWashBuffer重悬线粒体沉淀，4℃，1000×g离心5min；7．取上清，加入一新的离心管中，4℃，16,000×g离心10min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底；8.用50-100μLStoreBuffer或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或-70℃保存。四注意事项：1.以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。2.进行WesternBlot和2D-胶电泳，可直接在第7步的沉淀中加入上样缓冲液裂解线粒体。3.β-巯基乙醇有毒，请注意通风及防护五储存：本试剂盒三个月内使用可4℃储存，长期可置-20℃。一般低温度心机都有离心力显示，如果没有，可以用以下公式简单的换算。G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２G为离心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍数来表示；[rpm]２即：转速的平方；R为半径，单位为厘米。
